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HPLC蒸发光散射检测器

发布时间: 2022-06-23 09:35 来源:月旭科技(上海)股份有限公司

HPLC蒸发光散射检测器

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蒸发光散射检测器属于通用型检测器,能够分析任何挥发性低于流动相的化合物。其原理是:首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,zui后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。

示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化,并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定,与梯度洗脱不相容。另外,示差检测器的响应不如ELSD灵敏;低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰,并要求被分析化合物带有发色团,ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器的是,ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线,使得分辨率更好、分离速度更快。此外,因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。

经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器,在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生zui佳信号噪音比率的zui优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2.1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。

蒸发气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,以获得zui佳灵敏度。zui佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。

检测:悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中,样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测,产生电信号输送模拟信号输出端口,被用于模拟输出的数据采集。

ELSD的应用优势

1. 蒸发光散射的响应值与被测物质的官能团和光学性质无关,故可用于对各种物质的检测。对无特征紫外吸收或只有紫外末端吸收的大分子有机化合物的检测,显示出极大的优越性。

2. 简化了样品的预处理过程,缩短了分析时间。

3. 基线稳定,样品检测灵敏度高。流动相的蒸发使得ELSD和梯度洗脱相容,可以提高色谱分离的分辨率并缩短分析时间。

4. 只需一个标准品就可定量两个或更多的未知品,因此可以通过和内标比较来定量未知化合物。此特性对于组合化学中用组合技术合成的化合物的定量尤其有用。

5. 所选的未知物结构相似而分子量不同,定量准确性更高。

6. UVD定量未知化合物是很困难的,样品的紫外吸收值往往和代表样品质量的色谱峰大小无关,而对于ELSD来说,其响应不依赖于样品的光学特性,代表了样品的组成,检测信号更为直接的代表样品的真实浓度,与样品的质量浓度呈正比,因而能用于测定样品的纯度或检测未知物。

注意事项及补充

1、洗脱液需要雾化,所以雾化气流的纯度和压力会影响检测器的信噪比。  

2、流动相要蒸发掉,所以不能使用不易挥发的物质来调节流动相的pH值。可以通过蒸发温度的调节来使比被测物质沸点低的组分蒸发。在不使被测物质蒸发的前提下,温度越高,流动相蒸发越完全,色谱图基线越好、信号比就越高。浓度跟峰面积不成线性,分别取自然对数后成线性。


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