蛋白质糖基化的检测实验——酶脱糖基化
实验方法原理 | 用酶或化学脱糖基化、通过选择性标记或通过凝集素亲和层析法是检测蛋白糖基化常用方法。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、用 PNGaseF(N-多糖酶)处理 |
注意事项 | 1. 一个特殊的、未经分级的“脱糖基化级”PNGaseF和EndoF混合物可以从一些厂家买到。如果要用对碳水化合物特异的检测方法检测脱糖基化,应该记住:EndoF在一些糖基化位点上会留下抗-PNGaseF的GlcNAc基团。 2. 放射标记的蛋白对植物凝集素亲和层析是特别有用的,因为结合和洗脱的检测能够用液闪计数迅速获得。然而,如果可能,这些结果一定要通过电泳确证。. 3. 对于蛋白纯化,植物凝集素余和介质被证明是有用的,既可以保留住目的蛋白,也可以除去大部分不同糖基化的蛋白。如果需要去除半抗原糖,用来脱盐的凝胶过滤柱子通常就足够。 展开 |
其他 | 本实验来源《细胞实验指南》 黄培堂等译。 |