紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
摘 要 本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定,对此法进行方法验证,证明了此法具有专属性高,回收率高、精密度高,线性好、测定范围宽的特点,并对数据处理方法进行了比较,发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小,测定结果可信度较高。
关键词 维生素B1 紫外分光光度法 含量测定 方法验证 对照品比较法
维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法,紫外分光光度法和硫色素荧光法。中国药典用非水溶液滴定法测定原料药,片剂和注射剂采用紫外分光光度法,USP采用硫色素荧光法。采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰,对操作人员要求较高,采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰,测定准确但操作繁琐,且荧光测定受干扰因素较多,本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1 实验装置及试剂
1.1 仪器 BS210S型天平,UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料 维生素B1片(来源:成都第一制药,规格:1--00片*10mg,批号:061204),维生素B1标准品(分析纯),维生素B1对照品(200ug/ml,2.0mg/ml),维生素B1标准溶液(0.250mg/ml),空白辅料,盐酸溶液(9→1000)。
2 实验方法
处方分析:
组成 | 处方量(g) | 比例(%) |
维生素B1 | 10 | 16.39 |
淀粉 | 20 | 32.78 |
糊精 | 30 | 49.18 |
硬脂酸镁 | 1.0 | 1.639 |
生产 | 1000片 |
根据处方量分析,维生素B1含16.39%,辅料含83.61%。平均片重约61mg,取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法:
取供试品20片,精密称定,研细,称取片粉适量(约相当于维生素B125mg),置100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)约70ml,振摇15min使维生素B1溶解,再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,用干燥滤纸滤过,精密量取续滤液5ml,置另一100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,照分光光度法,在246nm的波长处测定吸收度,按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数为421计算,即得。
2、方法验证
2.1.线性和范围
精密称取维生素B1对照品约25mg,置100 ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)溶解并稀释至刻度,制备成含维生素B1 250μg/ml的对照溶液。分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,即得系列浓度的对照品溶液,照分光光度法,在246nm的波长处测定吸收度,以吸收度(A)对浓度(C)回归处理,得标准曲线和回归方程。
2.2. 回收试验(准确度试验)
对照品溶液的制备:对照品溶液的制备,同2.1项下。
供试品溶液的制备:精密称取维生素B1精制原料约0.25g,置50ml量瓶中,加入盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,制成5.0mg/m维生素B1溶液储备液;分别精密量取该溶液4、5、6ml置已加入比例量辅料(0.15g,1/100天平)的100ml量瓶中(一式三份),加盐酸溶液(9→1000)约70ml,振摇使之溶解,再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,滤过,精密量取续滤液5ml,置另一100ml量瓶中,摇匀,得高、中、低三种浓度的试验溶液,照分光光度法,在246nm的波长处测定吸收度,用对照品比较法计算含量。
2.3、精密度试验
取供试品20片,精密称定,研细,称取片粉适量(约相当于维生素B125mg),一式5份,置100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)适量,振摇15min,再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置另一100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,即得约含维生素B112.5ug/ml的供试品溶液。
另取维生素B1对照品适量,用盐酸溶液(9→1000)稀释制成12.5μg/ml的对照品溶液。照分光光度法(ChP2005二部附录IVA)在246nm处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度,用百分吸光度和对照品比较法分别进行计算,即得。
表1 维生素B1标准曲线的制备
编号 1 2 3 4 5 |
对照液浓度 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 (ug/ml) |
吸光度A 0.312 0.391 0.480 0.559 0.640 |
图2 维生素B1标准曲线图
由图2可得,采用此法进行维生素B1含量的测定,在浓度为8.00-16.00ug/ml
范围内线性关系较好(R²=0.9997)。
表2 维生素B1片回收率实验结果
编号 | 加入量(mg) | 对照液浓度(ug/ml) | 吸光度A | 测得对照液浓度(ug/ml) | 回收率(%) | |||
1 | 10.00 | 10.00 | 0.370 | 9.26 | 92.6 | |||
2 | 10.00 | 10.00 | 0.370 | 9.26 | 92.6 | |||
3 | 10.00 | 10.00 | 0.370 | 9.26 | 92.6 | |||
4 | 12.50 | 12.50 | 0.455 | 11.84 | 94.7 | |||
5 | 12.50 | 12.50 | 0.456 | 11.87 | 95.0 | |||
6 | 12.50 | 12.50 | 0.455 | 11.84 | 94.7 | |||
7 | 15.00 | 15.00 | 0.539 | 14.38 | 95.9 | |||
8 | 15.00 | 15.00 | 0.539 | 14.38 | 95.9 | |||
9 | 15.00 | 15.00 | 0.541 | 14.44 | 96.3 | |||
1 | 2 | 3 | X | RSD | RSD | |||
高 | 95.9% | 95.9% | 96.3% | 96% | 0.24% | 1.6% | ||
中 | 94.7% | 95.0% | 94.7% | 94.8% | 0.18% | |||
低 | 92.6% | 92.6% | 92.6% | 92.6% | 0 | |||
回收率平均值(%)=94.48%
RSD=1.6%
由表2可得,采用此法进行维生素B1含量的测定,加入量在10.00-15.00mg范围内,对照液浓度在10.00-15.00ug/ml范围内时,回收率较高。
表3 维生素B1片精密度考察实验结果
编号 | 加入片粉量(g) | 吸光度A | 浓度(ug/ml) | 百分吸光度法(%) | 对照品比较法(%) | 标准曲线% |
1 | 0.1724 | 0.431 | 12.57 | 81.44 | 95.88 | 88.38 |
2 | 0.1730 | 0.427 | 12.61 | 80.43 | 94.69 | 87.14 |
3 | 0.1723 | 0.428 | 12.61 | 80.62 | 94.91 | 87.38 |
4 | 0.1716 | 0.425 | 12.51 | 80.70 | 95.00 | 87.35 |
5 | 0.1723 | 0.433 | 12.56 | 81.89 | 96.40 | 89.03 |
对照品 | 0.447 | 12.50 |
当m=0.1715g 维B1浓度 12.50ug/ml
RSD1(百分吸光度法)=0.8%
RSD2(对照品比较法)=0.8%
RSD3(标准曲线法)=0.9%
表4 维生素B1片含量测定结果
测定方法 | 含量为标示量的百分数范围 | 含量为标示量的百分数均值 |
百分吸光度法 | 84.43%-81.89% | 81.02% |
对照品比较法 标准曲线法 | 94.69%-96.40% | 95.38% 87.86% |
百分吸光度法:含量不符合规定标准。
对照品比较法:含量符合规定标准。
标准曲线法:含量符合规定标准。
实验讨论
本次试验中分别采用百分比吸光度法、标准曲线法和对照品比较法所测定结