基因芯片的制备方法
基因芯片的片基主要有硅片、玻璃片、硝酸纤维膜、聚丙烯膜等寡核苷酸芯片以人工合成的寡核苷酸片断作为探针,制备方法主要有原位合成法和合成后点样法。而 cDNA 芯片以长片断的 PCR 产物作为探针,制备方法主要为合成后点样法。
(1)原位合成法 制备寡核苷酸芯片原位合成法设备昂贵,技术复杂。
(2)合成后点样法制备寡核苷酸芯片 技术相对简单,绝大部分公司使用这一方法合成工作用传统的 DNA 固相合成仪完成,合成后用自动化微量点样装置将其以比较高的密度涂布于硝酸纤维膜、尼龙膜、玻片上,并事先对支持物表面进行特定处理使带上特定的反应基团。
(3)cDNA 芯片的制备 原理类似于 southern 杂交,即事先对支持物表面进行特定处理使带上正电荷,将纯化后的 PCR 产物喷或点到支持物表面,DNA 分子以氢键和离子键吸附于支持物表面,如用紫外线交联则固定得更加牢固。点样方法和装置同合成后点样法。阵列密度虽不及原位合成寡核苷酸芯片高也可达到每张载玻片4万个基因。而 cDNA 芯片最大的优点是靶基因检测特异性非常好,用作表达谱研究结果可靠。
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