核黄素磷酸钠的性状鉴别检查方法
性状
本品为橙黄色结晶性粉末;几乎无臭;有引湿性本品在水中溶解,在乙醇、三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。比旋度避光操作。取本品适量,精密称定,加盐酸溶液(45→-100)溶解并定量稀释制成每1ml中约含15mg的溶液,依法测定(通则0621),比旋度为+38.0°至+42.0°。
鉴别
(1)取本品约1mg,加水100ml溶解后,溶液在透射光下显淡黄色并有强烈的黄绿色荧光;加无机酸或碱溶液,荧光即消失。(2)取本品适量,加磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解并稀释制成每1ml中含10g的溶液,照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定,在267nm、372nm与444nm的波长处有最大吸收,在240nm的波长处有最小吸收。(3)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集628图)一致。(4)取本品0.5g,加硝酸10ml,在水浴上蒸干,炽灼,残渣加水5ml使溶解,必要时滤过,滤液显钠盐的鉴别反应(通则0301)。
检查
酸度取本品0.40g,加水20ml溶解后,依法测定(通则0631),pH值应为4.0~6.5。溶液的澄清度取本品0.20g,加水10m1溶解后,溶液应澄清。感光黄素取本品35mg,加无醇三氯甲烷10ml,振摇5分钟,滤过,滤液照紫外可见分光光度法(通则0401),在440nm的波长处测定,吸光度不得过0.025。游离磷酸照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品0.20g(按干燥品计算),精密称定,置100ml量瓶中,加水30ml,振摇使溶解;加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液(取无水亚硫酸钠5g,亚硫酸氢钠94.3g与1-氨基-2萘酚-4-磺酸0.7g,充分混合,临用时取此混合物1.5g,加水10ml使溶解,必要时滤过)1ml,摇匀,用水稀释至刻度,摇匀,在20℃放置30分钟对照溶液精密量取磷酸盐对照溶液匚精密称取经105℃干燥2小时的磷酸二氢钾0.42g,置1000ml量瓶中加硫酸溶液(3→10)10ml与水适量使溶解,用水稀释至刻度,摇匀,临用时再稀释5倍]20ml,置100ml量瓶中,加水oml,摇匀;自“加钼酸铵硫酸试液2.5ml”起,制备方法同供试品溶液。测定法取供试品溶液与对照溶液,在740nm的波长处分别测定吸光度。限度供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。避光操作。供试品溶液取本品10mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相适量,振摇使溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀对照溶液精密量取供试品溶液2ml,置50m量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀核黄素对照品溶液精密量取含量测定项下的核黄素对照品溶液1ml,置10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液取核黄素磷酸钠混合对照品10mg,置5oml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.054mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇(85:15)为流动相;检测波长为267nm;进样体积20l。系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,核黄素磷酸钠峰的保留时间约为40分钟;各色谱峰出峰顺序如下表所示,核黄素磷酸钠峰与4′-核黄素磷酸钠峰之间的分离度应大于2.0。成分相对保留时间3′,4′-核黄素二磷酸酯0.23′,5′-核黄素二磷酸酯34′,5′-核黄素二磷酸酯0.53-核黄素磷酸钠0.74′-核黄素磷酸钠0.9核黄素磷酸钠核黄素测定法精密量取供试品溶液、对照溶液与核黄素对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。限度供试品溶液色谱图中如有与系统适用性溶液色谱图中相对应的杂质峰,按外标法以峰面积计算。按干燥品计,核黄素二磷酸酯(按核黄素计)含量不得过6.0%,游离核黄素含量不得过6.0%。核黄素二磷酸酯与游离核黄素计算公式如下:∑A×W×1/10核黄素二磷酸酯A×W×(1-d)×100%A1×W,×1/10游离核黄素A×W1×(1-d)×100%式中∑A为供试品溶液色谱图中3’,4′-核黄素二磷酸酯峰、3′,5′-核黄素二磷酸酯峰与4′,5′-核黄素二磷酸酯峰的峰面积之和;A1为供试品溶液色谱图中游离核黄素峰的峰面积;A为核黄素对照品溶液色谱图中核黄素峰面积;W为核黄素磷酸钠供试品称样量;W为核黄素对照品称样量乘以对照品含量;d为干燥失重。供试品溶液色谱图中除主成分峰、游离核黄素峰与核黄素二磷酸酯峰外,如有其他杂质峰,单个杂质不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍(1.0%),其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(4.0%)。干燥失重取本品约0.3g,在130℃千燥至恒重,减失重量不得过10.0%(通则0831)。
