怎样用酶标仪(光度测定法)做内毒素检测资料
一、光度测定法分为浊度法和显色基质法。
光度测定法干扰试验的制备
编号 | 内毒素浓度 | 配制内毒素的溶液 | 平行管数 |
A | 无 | 供试品溶液 | 不少于2个 |
B | 标准曲线的中点(或附近点)的浓度(设为λm) | 供试品溶液 | 不少于2个 |
C | 至少3个浓度(最低一点设定为λ) | 检查用水 | 每一浓度不少于2个 |
D | 无 | 检查用水 | 不少于2个 |
注 A:稀释倍数未超过MVD的供试品溶液。
R=(CS-Ct)/λm×100%
注:2005年版中国药典中指出:细菌内毒素试验所用的器皿需经过处理,以除去可能存
在的外源性内毒素。常用的方法是在250°C干烤至少60分钟。也可采用其他确证
不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械,如微板孔和微量加样器配套
的吸头等,应选用标明无内毒素,并且对试验无干扰的器械,试验操作过程防止微
生物污染。
二、关于显色基质鲎试剂试验的一些问题
微板法(56 Test) | |
能测样品数 (做平行管) | 需要做标准曲线:23个样本 不需做标准曲线:28个样本 |
每次需样品量 | 50 ul |
优缺点 | 96个孔同时操作,同时读数,效率与试管法相比可提高十倍以上,但该方法需要酶标仪(405nm滤光片) |
注意事项 | 为避免操作误差,每个样品均做2孔,再求其平均值 |
三、内毒素试验(内毒素定量检测)所需试剂及仪器
1.试剂(鲎试剂包括凝胶法——定性、显色基质法——定量、动态浊度法——定量)
名字 | 用途及说明 | 规格 |
鲎试剂 | 与内毒素反应,检测样品中内毒素用 | 10支/盒(凝胶法)、试剂盒(光度法) |
内毒素 | 与鲎试剂反应,做阳性对照,或烘箱验证 | 10支/盒 |
检查水 | 溶解鲎试剂用或稀释用 | 10支/盒(2ml、10ml)瓶(50ml) |
名字 | 用途及说明 | 规格 |
除热原吸头 | 稀释急加样。普通吸头会干扰试验,造成假阳性不能使用。 | 5支/小包 (200μl、250μl、1000μl) |
除热原试管 未除热原试管 | 稀释用或反应用容器 使用前需洗干净250度干烤1h | 6支/包 |
除热原空安瓿 | 稀释用或反应用容器 | 10支/盒 |
真空采血管 | 采血用 | 5ml |
除热原加样槽 | 加样用 (显色基质鲎试剂微板法用)配合8道移液器 | 3个/包 |
除热原微板 | 加样用(显色基质鲎试剂微板法用) | 个 |
除热原针筒 | 采样用 | 支 |
3.仪器
名字 | 用途及说明 | 规格 |
旋涡混合器 | 混匀内毒素溶液 | |
移液枪 | 加样 | 大龙(推荐)200-1000μl等各种规格 |
酶标仪 | 检测内毒素含量 (显色基质鲎试剂微板法用) | 北京普朗集团(DNM-9602G)型 (推荐) |
分光光度计 | 检测内毒素含量 (显色基质鲎试剂试管法用) | 可见光光度计 |
恒温水浴锅 | 保温、加热 |
名字 | 用途及说明 | 规格 |
G因子抑制剂 | 抑制G因子旁路反应 | 0.6ml/支 |
钙镁离子添加剂 | 阳离子调节剂 | 1ml/支 |
抗凝剂 | 血液样品使用 | 5ml/支 |
血液稀释剂 | 血液样品使用 | 5ml/支 |