动物疫病试剂盒常见问题产生原因及解决办法
1 目的
为了总结维德维康动物疫病试剂盒在使用过程中出现的问题、原因及解决办法，为客户解决常见问题提供技术参考，特编写此文件。
2 适用范围
本文件适用于维德维康动物疫病试剂盒的相关问题。
3 维德维康动物疫病试剂盒的常见问题
①酶标板吸光值偏高及出现假阳性；
②酶标板吸光值偏低及出现假阴性；
③酶标板避光显色后颜色无变化；
④试验结果的重复性不好；
上述问题产生原因 | 解决方案 |
检测样本 ①血清发生溶血，会出现假阳性； ②血清反复冻融使抗体效价下降，会出现假阴性； ③血清被细菌污染后反复冻融，或使用前未混匀，会导致实验重复性差。 | ①采集血清时应无菌操作，要求血清清亮无溶血，避免使用严重溶血的血清； ②血清保存时间不能太久，血清解冻后应该充分混匀，血清稀释后在加样前也要混合均匀，解冻后的血清争取一次性检测完毕，如需做多次检测，建议少量分装冷冻保存； ③若血清出现浑浊或沉淀，建议离心后取上清检测。 |
试剂盒内的试剂和组分 ①试剂过期或者不同批号试剂盒的试剂组分混用，会使吸光值发生偏差； ②试剂在使用过程中受到了污染，试剂反复回温，浓缩洗涤液结晶时没有溶解就使用； ③酶标记物使用不正确或已变质均会导致实验结果不成立（避光反应后不显色）。 | ①不要使用过期试剂和混用不同批号的试剂，避免试剂盒分多次使用； ②确认酶标记物是否来源于本试剂盒，且；避免取出的试剂再倒回原瓶；不要过早将酶标记物取出； ③确保使用试剂盒配套的洗涤液；浓缩洗涤液应用蒸馏水或去离子水稀释，如果有结晶要加热溶解后再使用。 |
实验室环境温度控制 ①实验室温度过高或者过低都会导致吸光值偏差； ②试剂盒回温及孵育未按规定温度及时间进行。 | ①保持实验室温度在20-25℃，避免在直射光照下或者通风口旁操作；试剂盒从冰箱中取出后，需在室温下放置40min以上，使试剂盒恢复到室温再使用，使用后立即放至2-8℃保存； ②回温及孵育的温度和时间要力求准确，孵育时酶标板不能叠放，以保证各板的温度可以平衡。 |
实验人员的操作问题 ①在使用加样器时，操作不正确或者将加样器吸头与板孔相接触，造成污染； ②洗涤液配制不正确或用了不合格的水配制，或使用了错误的洗涤液洗板，次数及方法不正确；手动洗板时用带纸屑的吸水纸拍板；吸水纸重复使用，导致酶标板污染，均会影响检测结果的准确性； ③试剂添加顺序错误或遗漏了实验步骤均会导致酶标板不显色； ④点板时间过长导致的加样时差也会对结果产生影响。 | ①严格按照试剂盒提供的说明书进行操作，试剂添加的顺序和步骤要正确； ②在使用加样器进行加样时，避免加样器吸头与板孔接触，取样时要更换吸头，同时要避免将样品加在孔壁上或产生气泡；检测大量样品时，应使用多道加样器分批次操作，一次只操作一块板；先将待检血清全部稀释完毕，再点板，以减少延时造成的误差； ③按照规定的洗板次数洗涤，每孔加入的洗涤液不少于规定的液量，手动洗板时不用带纸屑的吸水纸拍板，并且避免吸水纸重复使用。 |
仪器设备问题 ①酶标仪读数出现错误； ②加样器长期使用因机械磨损造成加样不准； ③洗板机污染，加液头堵塞等问题均会导致误差。 | 试验中常用到的酶标仪、加样器、洗板机、恒温箱及存放试剂的冰箱等仪器设备要定期维护和校准，确保仪器设备正常使用，避免试验误差。 |
建议
影响ELISA测定结果的因素较多，需加强每一个环节的质量控制，严格按照试剂盒的说明书进行操作，才会获得正确的试验结果。
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