Bio-Rad发布QX ONE ddPCR 数字PCR一体机问世
聚合酶链式反应 ( polymerase chain reaction,PCR) 提出至今已有20年时间,期间PCR已发展成为分子生物学领域的一项关键技术和常规技术,极大地推动了生命科学各个领域的发展。PCR技术自问世以来,在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。
QX ONE ddPCR系统
90 年代后期,美国 ABI 公司推出的实时荧光定量PCR( real time PCR,qPCR) 技术及相关产品更是将PCR由体外合成及定性/半定量检测技术发展成为一种高灵敏、高特异性和精确定量的基因分析技术。20 世纪末,美国约翰·霍普金斯大学Ludwig中心联合主任Kenneth Kinzler与同事Bert Vogelstein一起首先提出了“数字PCR”(digital PCR,dPCR) 的概念,将分析带入了绝对定量时代。
如今,ddPCR技术已经应用在多个方面,包括定量癌症标志物、测定病毒载量、区分基因组变异、验证新一代测序的结果、基因表达分析、转基因检测以及环境监测等等。此外,您还可以利用ddPCR技术来检验CRISPR/Cas9的基因组编辑效果。
目前市场主流的是三家:
1、赛默飞世儿的3D数字PCR(芯片式数字PCR):主要是将20ul反应体系分散到20,000个微孔中进行反应,变成20,000个反应体系,PCR反应结束后,采用CCD拍照,数阳性反应孔。
2、Bio-Rad的微滴数字PCR(油包水原理):将20ul反应体系采用液滴反应器形成20,000个油包水反应体系,PCR反应结束后,才有流式细胞术的原理,检测每一个液体,数阳性反应的液滴数量。
3、RainDance 的数字PCR(油包水原理):原理与伯乐微滴数字PCR相同,但是其液体形成能力比伯乐强很多,理论上可以产生1,000万个小油滴。
相对于荧光定量PCR(qPCR)而言,dPCR具备以下优势:
无需依赖参考物或标准品
通过使用更多PCR复制物能够提高精确度
对抑制剂具有较高耐受性
能够分析复杂混合物
对较小倍数改变的线性检测
实时荧光定量 PCR、传统 PCR 与数字 PCR 概述
图片来自赛默飞官网
目前Bio-Rad推出了全新的QX ONE ddPCR 系统,将ddPCR工作流程无缝整合成一体化设备,使其成为实验室中优化流程、扩大生产和发展业务的理想伙伴。此次即将推出的QX ONE系统将Bio-Rad的微滴式数字PCR(ddPCR)技术集成在单台自动化仪器中,适用于药物开发和生产质控,以及其他关键的检测环境。
高通量全自动ddPCR检验应用方案
QX ONE ddPCR系统整合了微滴生成、热循环反应及微滴读取等步骤,最大程度减少人工操作,提高了实验通量。配备四个独立的荧光检测通道,结合ddPCR特有的高阶多重PCR技术,可以在单反应孔中实现8重拷贝数变异(CNV)检测、5重突变检测或4重基因表达检测。兼容目前QX200 系统中所使用的supermix、assay和kit。
QX ONE ddPCR系统实验流程
QX ONE ddPCR系统实验流程
QX ONE ddPCR 系统的性能特点
QX ONE ddPCR 系统的性能特点
本产品仅限科研使用,不作为临床诊断