M15化学感受态细胞操作方法看似简单,细节很重要
M15化学感受态细胞是采用大肠杆菌M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。它能表达lac阻遏蛋白,抑制T5强启动子的表达。同时,pREP4还
赋予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是从pACYC改造而来的,含有p15A复制子。它能够与所有带ColE1复制起点的质粒共存。
主要特点
使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组,提高纯化
质粒的产量和质量。
M15化学感受态细胞操作方法
1、取100μl冰上融化的M15感受态细胞,加入目的DNA并用指尖轻轻敲打管底混匀(避免用枪吸打),冰上静置25分钟。
2、42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3、向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4、5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5、将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
M15感受态细胞感受态细胞使用注意事项
1、感受态细胞一般在冰上融化。
2、混入目的DNA时应轻柔操作。
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