引物(含修饰)的分子量是如何确定的?
非修饰的引物的分子量(MW)在随引物提供的报告单上可以找到。如果需要估计一个引物的分子量按每个碱基的平均分子量为324.5,引物的分子量=碱基数 x碱基的平均分子量,或按下列公式计算MW= (NA * WA) + (NC * WC) + (NG * WG) + (NT * WT) +(Nmod * Wmod)+(Nx * Wx)+( NI* WI) +16* Ns–62.
NA, NG, NC, NT, NI分别为引物中碱基A或G或C或T或I的数量,WA, WG ,WC, WT, WI分别为引物中碱基A或G或C或T或I的分子量,Nmod,Wmod分别为修饰基团的数目和分子量。对于混合碱基的分子量为混合碱基的分子量总合除以混合数,例如G+A混合的分子量为(313.21+329.21)/2 = 321.21。Ns为硫代数目,硫代每个位置增加分子量16。
常规碱基分子量
Base | Molecular Weight |
A | 313.21 |
C | 289.18 |
G | 329.21 |
T | 304.19 |
I | 314.2 |
U | 290.17 |
常规修饰基团分子量
5’-Biotin | 405.45 | 3’-TAMARA | 623.60 |
5’-(6 FAM) | 537.46 | 3’-Dabsyl | 498.49 |
5’-HEX | 744.13 | 3’-(6 FAM) | 569.46 |
5’-TET | 675.24 | 3’-Amino Modifier C3 | 153.07 |
5’-Cy5 | 533.63 | 3’-Amino Modifier C7 | 209.18 |
5’-Cy3 | 507.59 | 3’-Thiol Modifier C3 | 154.12 |