蛋白质自动测序仪的工作原理
蛋白质测序仪主要检测的是蛋白质一级结构（氨基酸序列），其基本原理沿用艾德蒙（Edman）化学降解法，这也是经典的蛋白质测序方法。利用 Edman化学降解法测定蛋白质或多肽N末端序列，在测定过程中，氨基酸残基依次与异硫氰酸苯酯（PITC）作用，从蛋白质N末端依次切割下来，形成稳定的PTH氨基酸后进行分析和鉴定。Edman降解进行蛋白质与多肽序列分析是一个循环式的化学反应过程，包括偶联、裂解、转化三个主要步骤[1]：
偶联在弱碱条件下，蛋白质或多肽链N末端残基与PITC偶联反应生成PTC-多肽。这一反应在45-48℃进行约15分钟，并用过量的试剂使有机反应完全。
环化裂解在无水三氟醋酸（TFA）的作用下，可使靠近PTC基的氨基酸环化，肽链断裂形成噻唑啉酮苯胺（ATZ）衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。剩余多肽链可以进行下一次及后续的降解循环。
转化 ATZ衍生物经25%TFA处理转化为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸）。每个循环反应从蛋白质或多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸开始进行下一个 Edman化学降解反应，最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。
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