核酸的定量测定实验——紫外分光光度法
实验方法原理 | 核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波长处。一般在260 nm 波长下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值为0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值约为0.020 , 故测定未知浓度RNA 或DNA 溶液在260 nm 的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便、迅速。若样品内混有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质, 则测定误差较大, 故应该先除去。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 用分析天平准确称取待测的核酸样品500 mg , 加入少量蒸馏水调成糊状, 再加入少量的水稀释。然后用5% ~6% 氨水调至pH7 , 定容到50 ml 。
【结果处理】 DNA (RNA)% = [ (A1 - A2) / 0 . 020 (或0 . 022 ) ] (μg/ ml)×100/ 样品浓度(μg/ ml ) 样品浓度= 500 mg/ ( 50 ×4/ 2 ×50/0 . 5) ml = 50 μg/ ml。 展开 |
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