基因表达腺病毒载体由腺病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。腺病毒基因组序列是从元件5’ITR开始，到元件3’ITR结束。

腺病毒基因组序列可容纳一个外源基因表达盒子，即目的基因表达盒子。目的基因表达盒子包括三部分序列：CMV启动子、目的基因和polyA。CMV启动子和polyA已经克隆在载体上，每次构建载体，只需通过site-specificrecominationcloning技术将感兴趣的目的基因序列克隆到载体上即可。

1、克隆方法

我们采用位点特异性重组的克隆方法，将目的基因克隆到腺病毒骨架上。如下图：

一般来说，将目的基因放在pDown入门克隆上。每次构建，我们只需构建一个携带目的基因的pDown，再与携带了CMV启动子的腺病毒骨架载体进行位点特异重组反应就可获得基因表达腺病毒载体。

2. 质量控制

我们会对每一个pDown进行目的基因片段测序，序列正确后再进行重组。然后对基因表达慢病毒载体挑克隆，并进行酶切鉴定。酶切鉴定合格后交付。

shRNA干扰腺病毒载体由腺病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUC ori。腺病毒基因组序列是从元件5’ITR开始，到元件3’ITR结束。

腺病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子：一个是shRNA表达盒子，另外一个是marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上，无需重新构建。我们提供了EGFP和mCherry两种荧光marker供您选择。shRNA表达盒子则包括三部分序列：U6启动子、shRNA和终止子。U6启动子和Marker基因表达盒子已经克隆在pDown入门克隆上，每次构建载体，只需通过annealing-ligation技术将感兴趣的shRNA和终止子克隆到pDown载体上，再通过site-specific recomination cloning技术将pDown入门克隆克隆到载体上即可。

1、克隆方法

我们采用引物退火连接和位点特异重组的克隆方法，将shRNA克隆到腺病毒载体上。

我们的shRNA干扰慢病毒载体使用了human U6 promoter转录shRNA。shRNA再体内被剪切成21nt的单链siRNA，21nt的单链siRNA与mRNA互补引起mRNA的降解。干扰效率决定于21nt的单链siRNA是否只与目标mRNA特异性100%匹配。您可以通过www.vectorbuilder.com选择感兴趣的人、小鼠和大鼠的shRNA进行载体设计。

 
2、质量控制

我们会对每一个shRNA干扰腺病毒载体进行挑克隆，并测序shRNA片段。正确后，再进行酶切鉴定，酶切鉴定合格后交付。