在我们研究基因功能的时候，基因敲除（Knock out，KO）是实现基因loss of function的重要调控方式。相比于传统的基因干扰（RNAi）技术，基因敲除可完全消除目的基因的表达，最终使其蛋白完全不表达或功能彻底丧失，也让我们可以更好地观察细胞表型的变化。

但基因敲除细胞模型的构建过程较为繁琐，需要耗费很长的实验周期，而且对于经验不是很丰富的研究者，很容易出现做了三四个月却最终敲除效果不彻底的情况，导致研究进度受阻。

赛业生物细胞基因敲除服务

赛业生物基于人工智能的AlphaKnockout基因编辑专家系统和CRISPR/Cas9技术进行优化升级，开发了一套基因编辑效率更高的Smart-CRISPR™基因编辑系统，可轻松实现细胞移码突变、片段敲除、多基因敲除等多种的敲除策略，并更好地解决蛋白残留表达的问题。根据我们过去上千个案例的服务经验，我们一般可将细胞的KO完整周期控制在7-12周，从而让客户更顺利地进行后续研究。

服务特色

1. 多种敲除策略

根据客户基因和细胞信息的不同，我们会采取最佳的敲除策略，极大提高目的基因敲除的成功率和蛋白的不表达效率。

2. 周期进一步缩短

赛业生物全面升级的细胞Smart-CRISPR™基因编辑系统，将KO实验各流程充分优化，在确保实验结果的前提下达到最快的交付周期。

3. 详尽的结果交付

我们不仅提供构建成功的KO纯合子细胞株，同时根据客户要求还可提供多个不同克隆，如杂合子、阴性克隆，交付前细胞均会经过严格的无菌检测和细胞生长状态的验证。此外，与细胞一起交付的，还包括专业的实验报告和质检报告。

细胞敲除服务优势

1. 独创Smart-CRISPR™技术：多种敲除策略，基因编辑效率显著提升，尽量保证蛋白不表达。

2. 专业的项目管理：24h内快速出方案，定期反馈项目进展，博士团队技术支持，详尽的交付报告。

3. 严格的质控体系：双重检测细菌、支原体等微生物，100%确保无污染；并充分鉴定敲除效果。

4. 丰富的成功经验：超千例项目成功案例，超200种细胞株成功案例，客户多篇文献引用发表。

5. 细胞到动物的整体服务方案：提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立、到表型分析的全套服务。

成功基因编辑细胞类型精选

细胞敲除成功案例

项目名称：人HCT116细胞PSME3基因敲除（片段敲除）

1、gRNA设计：

gRNA位点1：ATACGCTACCTAACATGGCTGGG； gRNA位点2：CCAGCATGCAAAATACAATGGGG

2、引物合成及质粒构建：

3、细胞转染

首先确定最佳的电转参数，进而通过电转的方式将载体转染进细胞。

4、筛选单克隆细胞并培养

5、PCR及电泳鉴定：

鉴定策略的原理如下：

6、测序鉴定：

ATAAACAGAGGATTTAAGACTTTTGTTATGTTTTAGACGC-del；1809bp--AGTGGCTAATGCCT GTAATCC CACCACTTTGGGAGGCCAA

7、克隆状态：

细胞检测结果：无菌、无支原体

培养体系：McCoy‘s 5A+ 10% FBS + 500μg/mL Hygromycin；1:3传代