目的：通过手术构建大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。

范围：动物平台

职责：动物平台所有成员

实验准备

操作步骤

1：手术MCAO造模 

(1) 准备6-8周龄小鼠，性别一致。

(2) 术前禁食12小时，正常饮水。

(3) 进行全身麻醉。

(4) 使用动物剃毛器进行颈部剃毛，使用碘伏消毒液擦拭，再使用75%乙醇擦拭消毒，置于宠物尿垫上仰卧位。

(5) 使用手术刀沿颈正中线纵向切开，沿正中钝性分离两侧鼓泡腺体，暴露颈前肌群，沿胸锁乳突肌內缘分离肌肉和筋膜，暴露颈总动脉及分支。

(6) 首先分离颈总动脉并穿单线备用，沿颈总动脉近心端结扎、使用动脉夹夹闭远心端靠近颈内动脉分支处。

(7) 颈总动脉近心端与动脉夹夹闭处中间以45°角开口，使用硅胶处理的栓线进入。

(8) 松开动脉夹，行线栓插入术，若线栓堵在1cm深度，可能是误入翼颚动脉，若在1.6cm处堵住，可能是卡在入颅处，上述情况需抽出栓线重新插入，切忌盲目插入引起颅内出血。

(9) 造模完成进行术后护理，给以葡萄糖灌胃，软质饲料，换药，注射抗生素等。

(10) 造模24小时进行神经功能缺失体征评分，参考Longa5分制法，0分：无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向对侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失，分值越高说明动物行为障碍越严重。

(11) 造模后观察48小时、72小时、7天生存情况。

2：取材

(1) 抓取造模完成的小鼠，进行全身麻醉。 

(2) 使用动物剃毛器进行头部剃毛。使用碘伏消毒液擦拭，再使用75%乙醇擦拭消毒，置于宠物尿垫上侧卧位。

(3) 使用手术刀行腹部切开术，外置腹部脏器，进行腹腔静脉采血，采血完毕放置试管架待血液自然凝固，再使用高速离心机分离血清，转速4000-6000转/分离心10分钟，若血清分离不充分，可再次离心10分钟，取上层血清放入-80℃保存备用。

(4) 对动物进行取脑操作，放入-80℃冷冻，冷冻完毕放入脑槽进行大脑切片处理。

(5) 取切好的脑片进行TTC染色，判断梗死区域。

(6) 取材后的手术器械擦拭后置于500mg/L次 NaClO3浸泡液中过夜浸泡消毒。

注意事项 

1、线栓重复使用次数过多，应及时更换线栓以防引起颅内出血。

2、麻醉剂量宁少勿多，麻醉剂量多会导致术后无法苏醒，而至实验失败。

3、对术后动物每天1次伤口换药，并给以抗生素注射。

4、操作人员必须佩带防护镜、鞋套、橡胶手套、帽子、口罩、工作服。

5、抽取动脉血针头斜面必须朝下，防止血液喷溅。

6、抓取老鼠需佩带防咬手套，防止咬伤。

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