提 要: 目的 通过重新构建新的3拷贝串联体
基因工程菌phPAB 2β(3) /M15,在原有肽抗生素hPAB2β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE312 hPAB 2β( 3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表达目标
蛋白的最佳工程菌株,进行传代稳定性
分析,并明确新建工程菌中目标融合蛋白的表达形式和亲和层析的效果,最后通过相同条件下,在逐步放大的发酵规模(1 L摇瓶, 3. 7 L和10 L发酵罐) ,与以往的3拷贝串联体工程菌phPAB 2β(3) /JM109进行对比研究(湿菌产量、目标蛋白表达率) ,同时观察新建工程菌在10 L发酵中目标蛋白的表达和遗传稳定性。结果 筛选出的最佳工程菌株的目标蛋白的表达效率为34. 8% ,经LB培养传代10次后,点种LB (AMP、KAN)平板,生长率为100% ,质粒保存率达100%。在1 L摇瓶, 3. 7 L和10 L发酵罐的发酵规模下,phPAB 2β(3) /M15与phPAB 2β(3) /JM109一样,目标融合蛋白都以包涵体形式表达,亲和层析效果相近,目标蛋白表达率无显著性差异( P > 0105) ,但发酵产量大于后者,有非常显著性差异( P < 0101) 。且新建工程菌在10 L发酵中发酵产量达到55. 15 g/L,诱导表达后的第5小时,蛋白表达达到高峰,蛋白表达率为30. 2% ,重组质粒保存率为100%。结论 新构建工程菌phPAB 2β(3) /M15比起原来基因工程菌phPAB 2β(3) /JM109,是更为理想且利于肽抗生素hPAB2β
工业生产的基因工程菌。
