双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法的比较

【摘要】目的对 3 种常用的双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法进行比较，优选脑脊液蛋白质提取方法。方法收集新诊断尚未经药物治疗的 16 例帕金森病患者和 7 例头痛患者的脑脊液，分别以 3 种不同的方法提取脑脊液中的蛋白质。①透析法：用PluseOne 微透析试剂盒处理脑脊液样品。②丙酮沉淀法：以冷丙酮溶液处理脑脊液样
品，丙酮的终浓度为 80%。③三氯醋酸（TCA）/丙酮沉淀法：以 4 倍体积的 10% TCA/丙酮溶液处理脑脊液样品，TCA 的终浓度为 8%，丙酮的终浓度为 80%。取沉淀物进行双向凝胶电泳，用银染法对电泳后的凝胶进行染色，比较经 3 种不同方法提取的脑脊液蛋白质的双向凝胶电泳图谱。结果经透析法处理样品的电泳图谱显示的蛋白点较清晰、较圆，条纹较少，但所见几乎都是高丰度蛋白，低丰度蛋白很难显现；经丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横竖条纹均较多，大部分蛋白堆积在凝胶的上部，下面的点也显示不清晰，蛋白点出现横向漂移；经 TCA/丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横条纹相对较少，低丰度蛋白能较清晰显现，样品中所含高丰度蛋白明显少于以上两种方法处理的样品。结论以 TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质进行双向凝胶电泳时聚焦效果较好，而且同时去除了大部分白蛋白，使低丰度蛋白能很好地显现出来，优于丙酮沉淀法和透析法。