DNA探针、 小核酸和mRNA的分离检测对质谱要求较高，需要精确的一级质量数、丰富的二级碎片、高分辨率（7万以上）用于排除假阳 性和对定量及定性结果的干扰。因此，无论是IP-RPLC模式还是HILIC模式分离，均推荐Orbitrap作为质量分析器，从而保障结 果的可靠性。...
在其他情况下，引物的质量会造成批次间的差异。如果对一致性要求比较严格，最好先纯化引物再进行RPA或者ERA反应。 使用引物和探针的时候还需要注意些什么？引物和探针需要同时添加到体系中，一先一后会使片段重组出现偏向性。 我该如何选择探针？ 如果使用适用于探针的其中一种试剂盒，需要注意的是，在标靶区域选择探针位置时，有一些序列限制。如果存在不合理的限制，本公司可帮助您设计备选检测 方案。 ...
业界对此进行了广泛的讨论，一个共识是造成检出率低，假阴性率高有很多原因，包括试剂盒的灵敏度、试剂盒原材料的质量、核酸提取的效率、仪器设备的质量、操作误差等，但是对试剂盒的灵敏度低的原因没有系统的分析。笔者认为，引物探针设计是决定试剂灵敏度的关键，设计上存在的问题是内在缺陷，很难通过优化试剂盒组分和调整实验条件来得到显著改善。...
2、引物退火温度Tm控制在58～60℃。 3、G+C为30%～80%。 4、3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C。 5、正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。 6、扩增产物长度不能太大，一般在80～250 bp，80～150bp最为合适。 7、要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。...
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